主题：新冠肺炎诊断标准（第一版1.16前）的逻辑困境 -- 惊蛰

你和“你的临床药学的朋友”知道出一个血清学检测抗体要多少时间么？

时间也不长，应急攻关也就四个星期吧……

所以钟南山那边现在才刚刚做出来，也只是做出来而已，还没完成一致性检测，而且还要测试当时选择的抗原表位的优劣。血清学检测的灵敏度和一致性更是个大问题，正常血清学检测光一个方法稳定下来就要折腾可能10年的时间。不开玩笑，血液检测单上的每一个指标背后那个数字都能发好几篇顶级医学杂志。

你和“你的临床药学的朋友”一无所知，所以才能这么轻飘飘地讲话

这个病毒是人造的。

造这个病毒的技术可以进一步提高。

有势力存心想灭绝某部分人类，而且他们是掌握解药的。

所以他们并不慌乱。

他们为了做这件事情，已经谋划了很多年了。

偏偏在天朝蒸蒸日上的关键时刻，

偏偏在春运季节，

偏偏在九省通衢的wuhan，

偏偏这个城市有野生动物市场，有病毒所。

这么多巧合，要说没有阴谋，

打死我也不信啊。

再联系到19年的猪流感，还有17年前的SARS，

还有突然离奇去世的加拿大病毒学家 Frank Plummer。

凡此总总，说明他们并不怕世人知道自己的计划。

因为他们的实力足够强大，而且还有下一阶段的计划。

现在天朝已经事实上与多数国家断绝了贸易往来，人员往来。

要小心他们实行下一步的计划了：诱发病毒变异，或者释放新版本病毒。

小强就是当年的光绪。能力固然有限，奈何太后太强势。

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【关于从患者血清中直接扩增 2019-nCoV 序列的思考】

两由之 2020-02-12

由于 2019-nCoV 核酸定量 PCR 出现高达 55%左右的假阴性 国家卫健委对于这次武 汉新冠肺炎的诊断标准进行了第六次改版，肺部的改变和发热作为新冠肺炎的主要诊 断标准，把定量 RT-PCR 的结果只作为参考标准。为什么定量 RT-PCR 出现如此多的 假阴性?如何提高 2019-nCoV 序列的检出率?这是必须要面对的两个主要问题。在抗 疫的初期，由于过度依赖 RT-PCR，放过了大量的隐形感染者，不得不说，后续的大 爆发和这个老百姓说的核酸诊断过多的假阴性有关。

定量 RT-PCR 的结果假阴性的原因是多方面的:

1. 取样的类型部位和时间点:一般而言，肺泡灌洗液效果最好，然而操作复 杂，需要富集病毒;鼻拭子/咽拭子是最常用的方法，但如果病毒负荷低， 很难得到阳性结果;

2. 样品 RNA 提取操作过程中病毒颗粒丢失:如果样品里仅仅只有几个拷贝的 病毒，高损失率的 RNA 提取方法会大大地丢失病毒颗粒;

3. 反转录的效率低下;

4. 扩增的循环数不够;

5. PCR 长度/引物设计/引物的特异性。

如果直接用肺泡灌洗液/鼻拭子/咽拭子进行 PCR, 由于有大量的粘液，分泌物，不适 合用于直接 PCR.

在武汉新冠肺炎爆发初期，报道说每天只能筛查 200 多病人，而今估计检查 2000 病 人没有问题，但这个检查的作用已经渐渐推到次要地位。如何提高核酸检查的阳性 率，是摆在我们科研人员面前的当务之急。

【病毒 PCR 扩增区】

经过仔细研究，比较，我挑选了 4 段 2019-nCoV 的核酸序列作为 PCR 的靶序列，这 四个片段长度都在 200bp 以内，位于病毒的 Spike 蛋白区，与其他冠状病毒/细菌/人 体基因组无交叉，建议设计新的引物和探针，optimize 后，用于一线检测。这四段序 列如下:

片段一 (Spike 区):

GACTCAGACTAATTCTCCTCGGCGGGCACGTAGTGTAGCTAGTCAATCCATCATTGCCTA 23646 CACTATGTCACTTGGTGCAGAAAATTCAGTTGCTTACTCTAAT 23689

片段二(Spike 区): GCCACTAGTCTCTAGTCAGTGTGTTAATCTTACAACCAGAACTCAATTACCCCCTGCATA 21645 CACTAATTCTTTCACACGTGGTGTTTATTACCCTGACAAAGTTTTCAGATCCTCAGTTTT 21705 ACATTCAACTCAGGACTTG 21724

片段三(Spike 区): CACACGCCTATTAATTTAGTGCGTGATCTCCCTCAGGGTTTTTCGGCTTTAGAACCATTG 22240 GTAGATTTGCCAATAGGTATTAACATCACTAGGTTTCAAACTTTACTTGCTTTACATAGA 22300 AGTTATTTGACTCCTGGTGATTCTTCTTCAG 22331

片段四(Spike 区): TCCTCGGCGGGCACGTAGTGTAGCTAGTCAATCCATCATTGCCTACACTATGTCACTTGG 23661 TGCAGAAAATTCAGTTGCTTACTCTAATAACTCTATTGCCATACCCACAAATTTTACTAT 23721 TAGTGTTAC 23730

【关于从患者血清采样】

WHO 的资料表明，MERS 冠状病毒感染，早期就在血清样品中扩增到病毒片段;很多 文献研究发现，猫感染猫科冠状病毒后，血清里也可以用 PCR 扩增出病毒片段。同样， 其它病毒感染，如呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)感染患者血清，也 可以在早期查出病毒。2003-2004 的 SARS 爆发，也有采集血清做 PCR 的报道。

越来越多的证据表明，武汉新冠肺炎的病人，在感染的早期，就经历了病毒血症，在后 期病毒血症引起多器官功能损害，病毒性心肌炎更是常见并发症和死亡原因之一。病毒 感染呼吸道上皮后，大量病毒复制，很快进入血液。因而，采集血样做病毒核酸 PCR， 可以极大限度减少医护人员的工作量，减少因为操作而传染的危险性。

血样采集后，放到 1.5 毫升 Eppendorf 管，离心后取血清，直接进入 RT-PCR. 余下的 血清备用，或用于抗 2019-nCoV IgM 检测。

【关于直接进行反转录 PCR】

由于本人不是从事病毒学研究，手上没有实际病毒操作数据。我只能根据以往直接的经验，草 拟一步法反转录 PCR。

1. 制备一步法 RT-PCR 反应混合物 (包含 1μl 反转录酶，1μl 100nmol 上游引物和下游 引物，1μl 0.1M DTT, 4μl 5X RT Buffer, 1μl RNase out, 10μl Heat-start Taq-SyberGreen reaction mixture (containing Taq/dNTP/PCR buffer and MgCl);

2. 加入患者血清 2ul, 混合均匀;

3. 反应步骤如下:

A. 25°C5min;50°C40min,95°C10min B. 95°C8s,57°C4s,72°C6s,40cycles. C. Meltingcurvefrom65°Cto95°C.

4. 分析PCR结果，如果溶解曲线正常，CT值33.3定义为一个拷贝，30为十个拷贝， 26.66 为 100 拷贝，余此类推。

做核酸检测，首先要做的就是判断引物和探针区域的保守性，这就是为什么CDC取了ORF1ab和N的原因。这里居然用最不保守的Spike区域，一开始就错了，写得越多错的越多，毫无讨论的价值

张笑春建议用CT表现还筛选，很正确的，后来也采纳了。传染病就这样，有几个选错了不要紧，关键别漏掉了。漏掉的出去，到处传染，控制不住 的。应收尽收，应治尽治，是正路。

我是巴巴的等着你的料，结果？？这完全满足不了胃口啊。

就你说的这些，我琢磨半天，不单得不出你给出的结论，并且奔着完全相反的地方去。最终我得出的也就是标题这四个字。

任泽平嘛，一直躺在我的公号列表里，去年大半年每天都在嚷嚷着降息，最终降息了他发了一条标题：猪也阻挡不了降息。不知道他在骂谁。

你说来说去，都是一个模子：这个人和那个人的关系，你不会不知道吧？怎么你们这些号称熟悉体制的都透着一股江湖味道？

说谁和谁的关系怎样，这是一个可以无限想象但无法证实也无法证伪的问题。鹤仙人跟一尊在101中学时就是发小，那又怎样？就能说明鹤是一尊的人马？难道他们在那时候就开始谋划大位了？

有的时候我真觉得可叹，一尊主政都七年了，确认谁是他的人马还要通过这些似有似无的“关系”，连川普都说：我和习大大有非常良好的私人关系。真真是孤家寡人，无人可用，我一点没说错。

首先，各常委分管一块，九龙治水这是江之后形成的“规矩”，既非常识，也非“祖宗成法”，只是一种政治格局。其实要说总统，江后期倒是更接近总统制。

再说张高丽，石油系统出身，一个流水掌柜，他管住建部能管几天？他倒是去调研过，然后14年5月住建部给了个报告说，楼市调控的方针是“不刺激不打压”，这就是稳健的策略。

随后5月份就是陈政高到任，然后930新政，接着股市大涨，股灾，同时深上北开始房价飙升，引领全国房市，后来事情我们都知道了。

这期间大海在拼命揭高丽在广东、山东、天津的一些事，大海跟首辅什么关系你不会不知道吧？然后到了15年，据境外媒体说，一尊有意让高丽分掉首辅的一部分权力，来管一管经济。然后就是天津大爆炸，同时炸出一堆弊案。据说其中也牵涉到高丽，让一尊颇为震怒，传说中拍了桌子的就有这一次。

所以怎么看来，这也不是几个人关上门开个会就能拍板的事情，这其中牵涉到来来回回多次的博弈，最终体现的实际上是央地之间的博弈。

房地产公司的钱包是漏的，不论赚了多少钱，最终都会回到地方政府手里，你要是想转移资产，呵呵，王健林、潘石屹的例子等着你。

所以这些谁是谁的人，什么密室政治，都是自寻烦恼，台面上的这些人，最终是被背后的利益集团驱动的。要道破，你也应该从这一层来破。

所以，你想说的那些，我都愿意相信，你说一尊不好，我也没觉得他尽善尽美。但你要说一尊和首辅是一个战壕，一个模子里出来的，那就是混淆基本矛盾，胡乱带节奏了。

至于谁和谁有良好的私人关系，这个我真不太感兴趣。川普前日里还带着一家子去中餐馆就餐了呢，这档口，这关系，真是挺好的呀，你觉得呢？

请指出。

海外颂圣派的逻辑原来是这样的吗？

棚改跟一尊、张高丽的关系，如果您不清楚的话，请好好学习这篇文章：

认真学习贯彻习近平总书记关于城镇棚户区和危房改造的重要讲话精神

注意时间线：2016年3月 讲话：张高丽

张高丽讲话：要进一步提高棚改货币化安置比例，商品住房库存量大的地方，货币化安置比例应更高一些，一线城市和部分二线城市可以因地制宜。各地要抓紧明确棚改货币化安置的具体目标、政策及措施。

您认为该负责的首辅呢？根本没出席这个会！

都切割了他们背后的势力归属，全是某人和某人的关系怎样，强调师爷治国，强调一尊是主导者，首辅是从属的，然后该有的毛病都有，这不就是在说一个战壕一个模子吗？

另外，我既非海外，也非颂圣，我对一尊的意见体现在其他帖子里。

我发现你总喜欢玩切割，文章里有利于你的，你就贴，不利于你的就忽略。

高丽是常委，首辅也是常委，高丽是副总理，无论从职级还是权限上说都是高丽在首辅的手下工作，而不是反之。

一尊关于棚改的发言，不妨贴出来：

　　要完善土地政策，坚持民生优先，科学编制土地供应计划，增加住房用地供应总量，优先安排保障性住房用地。

　　——2013年10月29日，习近平在主持十八届中共中央政治局第十次集体学习时强调

　　努力解决好住房问题，探索适合国情、符合发展阶段性特征的住房模式，加大廉租住房、公共租赁住房等保障性住房建设和供给，做好棚户区改造。

　　——2013年12月，中央经济工作会议举行，习近平在会上发表重要讲话

　　要深化城镇住房制度改革，继续完善住房保障体系，加快城镇棚户区和危房改造，加快老旧小区改造。

　　——2015年12月，中央城市工作会议举行，习近平在会上发表重要讲话

　　要有序推进易地搬迁扶贫，让搬迁群众搬得出、留得下、能致富，真正融入新的生活环境。

　　——2017年12月28日，习近平在中央农村工作会议上的讲话

　　加快推进住房保障和供应体系建设，要处理好政府提供公共服务和市场化的关系、住房发展的经济功能和社会功能的关系、需要和可能的关系、住房保障和防止福利陷阱的关系。

　　——2013年10月29日，习近平在主持十八届中共中央政治局第十次集体学习时强调

　　保障性住房建设是一件利国利民的大好事，但要把这件好事办好、真正使需要帮助的住房困难群众受益，就必须加强管理，在准入、使用、退出等方面建立规范机制，实现公共资源公平善用。

　　——2013年10月29日，习近平在主持十八届中共中央政治局第十次集体学习时强调

一尊强调的一直是保障房，廉租房，公租房政策，他去考察的棚改也基本是老少边穷，老旧危房，老工业区。

他三令五申强调增加保障性住房用地，地方政府什么时候当回事了？

胡温时代还大力建设廉租房，现在倒好，变成直升飞机撒钱，领导的要求落实到哪里去了？

至于高丽，被大海和口才派追打了两年，早就心气没了，只想着一届常委退休了事，他有必要对着干么？

我说了，不是我不愿意相信你，问题你给出的信息一再一再反对了你的观点，你让我信谁？

反而是需要能跟我讨论问题甚至能说服我并给出更好方案的人。我缺只会说“诺”的人吗？我拉拢基本盘干啥？为了今后儿子去武汉找工作方便一点？那些人那些想法的市井气息扑面而来

曾自洲:如果你相信财新网的话

还有另一篇报道可以验证：白皮手册与绿皮手册：新冠肺炎诊断标准之变。

所以专家组没说过要和海鲜市场相关，1月4日没说过，1月16日也没说过。和海鲜市场相关是武汉卫健委加进去的。

至于怎么加进去的，应该会调查清楚的。我觉得谁决定要加进去的可以和秦桧一个待遇。铸个铜像，永永远远跪在新冠罹难者纪念碑前。

谁把这一条加进去的，谁就是真正的罪人。

这个人或者这个小团体究竟是谁？

不过我直接忽略财新网，婊子一般的操行。

所以我认为是真的。

不过看高福不慌不忙的样子，估计就是没什么问题。