主题:高精度单碱基编辑工具,能不能请各位先生教学一下? -- 桥上

大河奔流 导读 复 3 阅 1293

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2019-06-11 10:50:06
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冰冻三尺冰冻三尺`31634`/bbsIMG/face/0005.gif`70`1989`3982`36579`从二品:光禄大夫|镇军大将军`2009-02-07 19:58:06`
这个是基于老技术的改进 7

这是一篇应用的文章,而不是研究基因编辑工具的文章。

“杨辉研究组团队对单碱基编辑的胞嘧啶脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶分别进行了突变优化,最终获得能够完全消除RNA脱靶并且维持DNA编辑活性的高精度单碱基编辑工具。”

我理解的是团队针对PTPA基因的引物做了优化。而不是说改进了这个工具本身。文章里面这部分讲得很少。

UBE3A-mediated PTPA ubiquitination and degradation regulate PP2A activity and dendritic spine morphology

原文链接:

https://www.pnas.org/content/early/2019/05/29/1820131116#sec-9

要具体看materials and methods

https://www.pnas.org/content/pnas/suppl/2019/05/29/1820131116.DCSupplemental/pnas.1820131116.sapp.pdf

里面有一句话

Ube3a deletion mice were generated by Jiang and colleagues (1).

这个UBE3A 单基因突变老鼠是1998做出来的,用同源重组。很早的技术了。这个技术费时费力,在老鼠细胞好做,人细胞很难搞。这个技术不能用脱靶率来衡量,只能用命中率来衡量。百万分之一的命中率吧。

Jiang Y-h, et al. (1998) Mutation of the Angelman Ubiquitin Ligase in Mice Causes Increased Cytoplasmic p53 and Deficits of Contextual Learning and Long-Term Potentiation. Neuron 21:799– 811.

DNA层面和RNA层面两码事。人体每个细胞DNA都一样(红细胞除外),但RNA的表达完全不一样。所以眼睛是眼睛,耳朵是耳朵。

“而杨辉团队这次将DNA编辑工具脱靶的检测范围首次扩展到了RNA水平”。不明白记者想说啥,测量RNA水平的qPCR或者RNA-seq是标准操作吧,没有才是奇怪的。


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通宝推:桥上,
最后于2019-06-11 10:58:33改,共1次;
2019-06-11 10:50:06

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